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细胞瞬时/稳定转染
细胞转染的基本原理是将外源的DNA克隆到载体上后导入细胞,借助宿主细胞表达载体上的目的片段,从而使目的基因在细胞中发挥功能。目前转染方法有多种,如脂质体转染法、磷酸钙-DNA共沉淀法、电穿孔转染法、腺病毒感染等。
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原代细胞分离培养与鉴定
原代细胞是来源于不同组织器官,胚胎及血液的新鲜样本经特殊实验方法处理而制备的原初培养细胞,这一过程被称为原代细胞分离。细胞的分离纯化和细胞培养技术是细胞生物实验的基础。
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载体构建
载体构建(vectorconstruction),是把目的DNA分子运送到受体细胞中去,因此必须寻找一种能进入细胞、装载了外来的DNA片段后仍能照样复制的运载体。
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定点突变
定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。
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甲基化检测
DNA甲基化在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下的CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶,是最早发现的修饰途径之一。
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SNP
SNP,即单核苷酸多态性(SingleNucleotide Polymorphism,SNP),主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。与其它分子标记相比,SNP 分辨率最高也最为丰富,覆盖基因组范围大,遗传上比较稳定。
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siRNA
siRNA是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。
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miRNA
小 RNA是 19~28 nt 的调控RNA分子,主要包括微 RNA(micro RNA,miRNA)和小干涉RNA(short interfering RNA,siRNA)两类。
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实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法,最后通过标准曲线(内参)对未知模板(待测样品)进行定量分析的方法。
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